自然殺傷細胞活性概述
自然殺傷細胞又稱NK細胞,其主要的功能特征是對腫瘤細胞及病毒感染細胞具有非特異性的殺傷力,這種殺傷效應(yīng)不依賴抗體與補體,體外檢測NK細胞活性是診斷NK細胞功能及其與某些疾病關(guān)系的一個重要手段。
自然殺傷細胞活性正常值
自然釋放率要求<10%;自然殺傷率大約35%~85%,平均值60%。
自然殺傷細胞活性臨床意義
K細胞主要分布在腹腔滲出液,外周血、脾臟中;NK細胞主要分布在骨髓、外周血和脾臟中。臨床主要用于腫瘤、病毒感染、寄生蟲感染、自身免疫和移植免疫等病人,檢測其K、NK細胞殺傷功能,在維持和調(diào)節(jié)特異性免疫中起重要作用。
自然殺傷細胞活性檢查方法
(1)效靶細胞作用:將分離好的淋巴細胞懸液(效應(yīng)細胞)和標記的K562細胞(靶細胞)按100∶1的比例加入平底塑料試管中,按表1操作,同時設(shè)自然釋放管(作為對照管),每個標本作了3個復(fù)管,最后用培養(yǎng)液使每管增至1ml,1500r/min離心,促進效靶細胞結(jié)合,置37℃、5% CO2孵箱內(nèi)孵育18h。
(2)酶促反應(yīng):取出孵育試管,棄去各管上清液,剩下的細胞加一定濃度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混勻后37℃水浴30min,促使被攻擊的靶細胞釋放125IUdR,隨后各管立即加入0.8ml Hank液終止酶促反應(yīng)?;靹蚝?500r/min離心2min。
(3)測放射強度和計算:用γ型計數(shù)器分別測各管(上清和細胞管)cpm值,按照公式計算。
自然殺傷細胞活性注意事項
(1)要求效/靶細胞比為100∶1,若比>100∶1,自然殺傷率不呈對數(shù)增加。且標本用量亦大。
(2)標記靶細胞放置時間不宜過久。因隨時間延長死細胞增加,自然釋放率欠準確。
(3)標記的125IUdR濃度要合適,要求125IUdR的放射性濃度為1.11×107Bq/ml,如濃度過低,標記率<0.1cpm細胞,檢測結(jié)果受影響。