甲型肝炎抗原概述
甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)為一直徑為27~32nm的二十面體立體對(duì)稱圓球形顆粒,無(wú)包膜,核心為單鏈正股RNA。HAV屬小RNA病毒科嗜肝病毒屬(hepatovirus)或嗜肝RNA病毒屬(heparnavirus)。HAV主要通過(guò)手-口途徑傳播,潛伏期15~50天,平均28天。病毒常在患者血清ALT升高前的5~6天就存在于患者的血液和糞便中。發(fā)病2~3周后,隨血清中特異抗體的產(chǎn)生,血清和糞便的傳染性就逐漸消失。HAV的實(shí)驗(yàn)室診斷可進(jìn)行抗原檢測(cè)。
甲型肝炎抗原正常值
陰性。
甲型肝炎抗原臨床意義
HAVAg存在于病人感染后10~20d的糞便中,一般在發(fā)病前1~15d從糞便中排出,臨床上不易捕捉到。發(fā)病1周時(shí)陽(yáng)性率42.9%,1~2周時(shí)為18.3%,半個(gè)月后消失。因此,臨床上較少用。如果HAVAg陽(yáng)性,表示病人正在感染甲肝,為急性期早期。
甲型肝炎抗原檢查方法
1、甲型肝炎抗原的測(cè)定原理
夾心ELISA法,即包被抗-HAV,加待檢血清,再加酶標(biāo)記抗-HAV,加底物顯色,酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。若用硝酸纖維素膜(NC)代替聚苯乙烯板,即NG-EIA法,抗原的檢測(cè)可得到加強(qiáng),能檢測(cè)到1ng的HAV蛋白,相當(dāng)于1.5×104病毒顆粒。
2、試劑
國(guó)內(nèi)有商品化試劑盒供應(yīng),內(nèi)含抗μ鏈包被的反應(yīng)板(條),HAV應(yīng)用液,抗HAV-HRP標(biāo)記物,以及抗HAV IgM陰、陽(yáng)性對(duì)照血清,樣品稀釋液,洗滌液,底物液及終止液等試劑。
3、操作方法
應(yīng)按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。一般試劑盒分兩類。
(1)三步法:本法操作步驟較多,檢測(cè)費(fèi)時(shí),有逐漸被二步法取代的趨勢(shì)。
①加稀釋樣品:在包被反應(yīng)板(條)孔內(nèi)加入1∶1000倍稀釋樣品100μl,每次實(shí)驗(yàn)有陰、陽(yáng)性對(duì)照,37℃保溫2h,洗板3次。
②加HAV:各孔加HAV 100μl,37℃ 1h后移至4℃過(guò)夜,洗板3次。
③加抗HAV-HRP:各孔加抗HAV-HRP 100μl,37℃保溫3h,洗板4次。
④顯色:各孔加入底物液100μl,37℃保溫15min。
⑤終止反應(yīng):各孔加入終止液50μl。
⑥結(jié)果判讀。
目測(cè)法:無(wú)色或略帶淡黃色為陰性,橘黃色為陽(yáng)性。
比色法:在酶標(biāo)儀上以試劑空白校零點(diǎn),測(cè)各孔在492nm光密度值,當(dāng)樣品A值/陰性對(duì)照A值大于或等于4為陽(yáng)性,低于4為陰性。
(2)二步法操作:按上法加稀釋樣品保溫、洗滌后,同時(shí)各孔加HAV 50μl及抗HAV-HRP 50μl,混勻后37℃保溫1h,洗板4次,以后同上法顯色和判讀結(jié)果。
甲型肝炎抗原注意事項(xiàng)
檢查前:不隨便亂吃東西,特別是含又酒精和油膩的東西。
檢查時(shí):放松身心。