丁型肝炎抗原概述
丁型肝炎病毒抗原存在于受感染的細胞內(nèi)和外周。丁型肝炎病毒急性感染早期,于乙型肝炎病毒表面抗原陽性期內(nèi)可在血液中檢出丁型肝炎病毒抗原,持續(xù)1~2周;慢性感染時可持續(xù)保持于低滴度水平。
丁型肝炎抗原正常值
(1)目測法:棕色或黃色為HDAg陽性,無色為陰性。
(2)比色法:應(yīng)用酶標(biāo)儀測定波長492nm的光吸收值(A),根據(jù)樣品的A值和陰性對照A平均值計算S/N值或閾值,凡樣品S/N值≥2.1或大于閥值為陽性,反之為陰性。 閾值=陰性對照A492平均值×2.1。
丁型肝炎抗原臨床意義
丁型肝炎病毒抗原,存在受感染的肝組織細胞內(nèi),外周血的完整病毒內(nèi),患者外周血中HDAG陽性表明體內(nèi)有丁肝病毒復(fù)制,血中有丁型肝炎病毒。
丁型肝炎抗原檢查方法
(1)取包被液稀釋抗-HDV IgG包被聚苯乙烯板,每孔100μl放37℃1h,4℃過夜。
(2)洗3次后,每孔分別加入待檢血清和陰、陽性對照血清50μl(陰性對照血清孔,陽性對照血清2孔)和10%Tween20 50μl,充分混合均勻后放室溫過夜,使之裂解丁肝病毒表面包裹的HBsAg釋放丁肝抗原。
(3)洗3次后,每孔加入50μl HRP-抗HDV抗體(稀釋液中除含10%小牛血清外還含有10個ELISA單位的抗HBc單克隆抗體),放45℃1h(或37℃2h)。
(4)洗3次后,每孔加50μl新鮮配制的底物液,放室溫暗處顯色15~30min后每孔加25μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
丁型肝炎抗原注意事項
(1)由于丁型肝炎與乙型肝炎感染同時存在,外周血經(jīng)除污劑處理后,可能HBAg與HBcAg同時存在,因此要注意注意防止HBcAg的干擾,故酶標(biāo)記物中必須加入非標(biāo)記的特異性中和HBcAg的單克隆抗體以排除之。
(2)由于外周血中抗原量少,血清不宜稀釋至少要用30~50μl。
(3)測定結(jié)果最好用比色法,以免造成假陽性或假陰性。
(4)對可疑標(biāo)本建議進行重復(fù)試驗。