唾液分泌型免疫球蛋白概述
唾液中的免疫球蛋白主要是SIgA和SIgG。靜止性唾液中SIg含量常高于刺激性唾液。常采用RIA和單向擴(kuò)散法測定。兒童唾液的SIgA和SIgG含量明顯低于成人,隨年齡遞增,16歲后接近成人水平。
唾液分泌型免疫球蛋白正常值
兒童唾液的SIgA和SIgG含量明顯低于成人,隨年齡遞增,16歲后接近成人水平。
唾液分泌型免疫球蛋白臨床意義
(1)Ig增高唾液腺的炎癥、惡性腫瘤等可破壞血液-唾液屏障,使血液中的Ig進(jìn)入唾液,使SIgA、SIgG、SIgM均可增高。某些病毒感染如麻疹早期,可從唾液中檢出特異性SIgA型抗體,有助于診斷。sjogren綜合征屬自身免疫性疾病,主要侵犯外分泌腺,使唾液中SIgA增高。口腔局部炎癥亦可增高。
(2)Ig減低病理性唾液Ig減低見于原發(fā)性或繼發(fā)性免疫缺乏病如先天性丙種球蛋白缺乏癥、原發(fā)性選擇性SIgA缺乏癥、應(yīng)用免疫抑制劑和放射治療時(shí),齲齒患兒及大量吸煙者SIgA也可降低。
唾液分泌型免疫球蛋白檢查方法
本法分三個(gè)步驟,即抗原與抗體反應(yīng)、B和F分離和放射性測定。
(1)抗原與抗體反應(yīng):將標(biāo)本(非標(biāo)記抗原)、標(biāo)記抗原和抗血清順序定量加入小試管內(nèi),置室溫(15~30℃)作用24h,使其充分競爭結(jié)合。
(2)B、F分離:分離技術(shù)多種多樣,常用沉淀法。
①第二抗體沉淀法:又稱雙抗體法,在受檢抗原與第一抗體特異性反應(yīng)后加入相應(yīng)的第二抗體,使形成的抗原-第一抗體-第二抗體的復(fù)合物共沉,一經(jīng)離心即可使結(jié)合標(biāo)記抗原B與游離抗原F分離。本法是特異性沉淀,分離完全,非特異性結(jié)合力低。但第二抗體用量較大,成本較高。此外標(biāo)本濃度、抗凝劑的有無因素可在一定程度上影響結(jié)果。
②聚乙二醇(PEG)沉淀法:使蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)狀態(tài),水化層破壞而導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。本法優(yōu)點(diǎn)是PEG制備方便、價(jià)廉、分離快速,缺點(diǎn)是非特異沉淀物較多,分離不完全。
③第二抗體-聚乙二醇沉淀法:本法既有PEG法的快速沉淀優(yōu)點(diǎn),且保持第二抗體特異性沉淀的作用,又減少第二抗體用量,并降低PEG濃度,使非特異沉淀物減少。
④活性炭吸附法:利用活性炭表面活性將小分子的游離部分吸附。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖,使它表面具有一定孔徑的網(wǎng)眼,從而允許小分子游離抗原或半抗原逸入而被吸附,而大分子復(fù)合物則被排斥在外。在抗原與抗體反應(yīng)后,加入葡聚糖-活性炭,放置5~10min,使游離抗原吸附在活性炭顆粒上,離心使顆粒沉淀,上清液中含有結(jié)合的標(biāo)記抗原。
(3)放射性強(qiáng)度測定:B和F分離后,即可測定其放射性強(qiáng)度。測量儀器有兩類:液體閃爍計(jì)數(shù)儀(測β射線)和晶體閃爍計(jì)數(shù)儀(測γ射線)。計(jì)數(shù)單位是探測器輸出的電脈沖數(shù),單位為cpm(脈沖數(shù)/min)。
每次測定均需作一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,以標(biāo)準(zhǔn)抗原的不同濃度為橫坐標(biāo),以測到的相應(yīng)放射性強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖。放射性強(qiáng)度可任選B或F,亦可采用計(jì)算值B/B+F、B/F或B/B0。標(biāo)本應(yīng)作雙份測定,取其平均值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的受檢抗原濃度。
唾液分泌型免疫球蛋白注意事項(xiàng)
放射免疫測定具有靈敏度(可測定鈉克甚至皮克水平)、特異性強(qiáng)(可分辨結(jié)構(gòu)類似的抗原)和準(zhǔn)確性好(鈉克量的回收率接近100%)。