幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測概述

幽門螺桿菌免疫學(xué)檢查是通過測定血清中的幽門螺旋桿菌抗體來檢測幽門螺旋桿菌感染，包括補被動血凝測定、免疫印跡技術(shù)和酶聯(lián)合吸附測定(ELISA)等。 

• 檢查部位 腹部
• 科室 內(nèi)科
• 相關(guān)疾病 消化系統(tǒng)潰瘍病 幽門螺桿菌感染 胃反應(yīng)性淋巴增生 小兒幽門螺桿菌感染 胃潰瘍 復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍
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• 相關(guān)癥狀 腹痛 食欲減退 消化性潰瘍 胃痛

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測正常值

• 結(jié)果為陰性。 

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測臨床意義

• 異常結(jié)果：　(1) 被檢血清凝集滴度低于抗原對照4倍兩孔或4倍以上為陽性。恢復(fù)期血清抗原滴度比急性期高4倍或4倍以上判為陽性。　(2) 有特殊顯色反應(yīng)，證明有某種蛋白質(zhì)存在?！?3) 待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性。　需要檢查人群：消化道潰瘍患者。 

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查方法

• 一、被動血凝測定
  患者刺取腦脊液，采用稀釋抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板，將乙腦抗原作倍比稀釋，使每孔含25uL, 被檢血清用稀釋液作1：10稀釋，每孔加人25uL，再滴加凍干乙腦單克隆抗體致敏羊血紅細(xì)胞25uL，37℃下放置數(shù)小時后觀察結(jié)果。
  二、免疫印跡技術(shù)
  （一）蛋白質(zhì)樣品獲得：細(xì)菌誘導(dǎo)表達(dá)后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細(xì)胞，真核細(xì)胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。
  （二）電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。
  （三）轉(zhuǎn)移：（半干式轉(zhuǎn)移）
  1、電泳結(jié)束后將膠條割至合適大小，用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡，5min×3次。
  2、膜處理：預(yù)先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中10min。
  3、轉(zhuǎn)膜：轉(zhuǎn)膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多余的液體吸干。接通電源，恒流1mA/cm2，轉(zhuǎn)移1.5hr。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，斷開電源將膜取出，割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標(biāo)準(zhǔn)的條帶染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然后用雙蒸水洗，風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存，留與顯色結(jié)果作對比。
  （四）免疫反應(yīng)：
  1、用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。
  2、加入包被液，平穩(wěn)搖動，室溫2hr。
  3、棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。
  4、加入一抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部），4℃ 放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實驗組相同。
  5、棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。
  6、加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋），平穩(wěn)搖動，室溫2hr。
  7、棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。
  8、加入顯色液，避光顯色至出現(xiàn)條帶時放入雙蒸水中終止反應(yīng)。
  三、酶聯(lián)合吸附測定
  常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。
  1.間接ELISA
  本法主要用于檢測抗體。間接ELISA的操作程序如下。
  （1） 材料
  ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；
  ② DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；
  ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
  （2） 方法步驟
  ① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干；
  ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干；
  ③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干；
  ④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液；
  ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。
  2.雙抗體夾心ELISA
  本法主要用于檢測大分子抗原。
  ① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干；
  ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干；
  ③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干；
  ④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液；
  ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測注意事項

• 不適宜檢查人群：無?！z查前禁忌：注意保護好腦部;準(zhǔn)備好各種包裝液，并配置好濃度?！z查時禁忌：　(1) 患者取腦脊液坐好，以免弄傷頭部。　(2) 所用單克隆抗體致敏羊血紅細(xì)胞要凍干才使用?！?3) 一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預(yù)實驗確定最佳條件?！?4) 顯色液必須新鮮配置使用，最后加入H2O2?！?5) DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細(xì)?！?6) 嚴(yán)格控制影響標(biāo)記效率的因素如溫度、時間、pH、酶和抗體量等。　(7) 裝層析柱時要使柱體均勻、柱面平整，無氣泡、裂隙。