熱鹽水試驗(yàn)概述

熱鹽水試驗(yàn)是利用熱鹽水對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行檢查，用于檢查細(xì)胞核溶解情況。

• 檢查部位 其他
• 科室 內(nèi)科體檢、保健科
• 相關(guān)疾病 貧血
• 相關(guān)癥狀 靜脈出血 動(dòng)脈出血 反復(fù)出血 白血病細(xì)胞浸潤(rùn) 口渴

熱鹽水試驗(yàn)正常值

• 細(xì)胞核不溶解、細(xì)胞形態(tài)清晰為陰性。

熱鹽水試驗(yàn)臨床意義

• 異常結(jié)果：檢查結(jié)果為陽(yáng)性。在粒細(xì)胞系統(tǒng)中，中幼粒細(xì)胞以下各階段細(xì)胞的大部分，細(xì)胞核被溶解而且程度明顯(++-+++)。原始粒細(xì)胞的細(xì)胞核較少被溶解或不溶解，程度也輕(+-++)。早幼粒細(xì)胞細(xì)胞核溶解情況介于二者之間。淋巴與單核細(xì)胞一般不溶解，偶見(jiàn)輕度溶解(+)。以溶解(+)以上的幼稚細(xì)胞>10%為診斷界限。急性粒細(xì)胞診斷符合率達(dá)78.5%，而急性單核或淋巴細(xì)胞均不符合。有助于急性白血病細(xì)胞類(lèi)型的鑒別。但幼稚細(xì)胞溶解(+)以下，<10%，不能完全排除急性粒細(xì)胞白血病。　
  需要檢查的人群：有貧血、出血、感染、發(fā)熱明顯特征的人群。

熱鹽水試驗(yàn)檢查方法

• 1. 樣本處理：
  a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開(kāi)的組織，可用雙層紗布過(guò)濾。
  b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800*g 5~10 min離心收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)。每次提取需要5*107個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50ul Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。
  2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，4℃，700*g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀;
  3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃， 700*g 離心5min。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，細(xì)胞核沉淀在管底;
  4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉，1000*g 離心10min ，棄上清，得較純的細(xì)胞核沉淀;
  5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

熱鹽水試驗(yàn)注意事項(xiàng)

• 不合宜人群：無(wú)。
  檢查前禁忌：檢查前一天不吃過(guò)于油膩、高蛋白食物，避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。體檢前一天的晚八時(shí)以后，應(yīng)禁食。
  檢查時(shí)要求：
  1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，第一是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
  2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
  3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。