痰液中分泌型IgE概述

SIgE的產(chǎn)生部位與SIgA相似，由呼吸道黏膜固有層中的漿細(xì)胞產(chǎn)生，分布于黏膜組織及外分泌液中，這些產(chǎn)生部位正是過敏原的侵入門戶和過敏反應(yīng)好發(fā)部位。 ELISA的原理是基于抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體保持其免疫學(xué)活性，抗原或抗體的酶結(jié)合物既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，故可極大的放大反應(yīng)的結(jié)果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 

• 檢查部位 頭部
• 科室 內(nèi)科
• 相關(guān)疾病 支氣管炎
• 相關(guān)癥狀 咳嗽 干咳

痰液中分泌型IgE正常值

• 0.1-9mg/L。 

痰液中分泌型IgE臨床意義

• IgE是單體，8S，19×104 ku，其重鏈較γ鏈長。多一個(gè)功能區(qū)(CH4)，借此可與細(xì)胞(如肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞)結(jié)合，在一定條件下觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)生物活性物質(zhì)釋放，故稱IgE是引起Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體。支氣管哮喘及過敏性肺炎患者，其痰中SIgE含量可增高。 

痰液中分泌型IgE檢查方法

• ELISA為多反應(yīng)、多試劑、多步驟的檢驗(yàn)方法，必須嚴(yán)格按照要求細(xì)心謹(jǐn)慎操作，否則得不到準(zhǔn)確的結(jié)果。用于檢測不同項(xiàng)目的ELISA操作雖略有差別，但均包括加樣、保溫、洗滌、比色等步驟，以下敘述各步驟的操作要點(diǎn)。
  (1)試劑準(zhǔn)備：按試劑盒說明書要求，稀釋或配制試驗(yàn)中需要的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)該用pH計(jì)測量。從冰箱取出的試驗(yàn)用試劑溫度應(yīng)達(dá)到室溫后使用。在用HRP作為標(biāo)記物的試驗(yàn)中，不可用被金屬污染的容器。
  (2)加樣：按要求準(zhǔn)備包被好的ELISA板。血清(劃體液)標(biāo)本應(yīng)該是新鮮采集的或在冰箱中妥善保存的，高度溶血或混濁的標(biāo)本不宜使用。含疊氮鈉作為防腐劑的標(biāo)本不可用于HRP標(biāo)記的一步法ELISA。加樣時(shí)應(yīng)將標(biāo)本加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可出現(xiàn)氣泡。定量測定中加樣量的準(zhǔn)確度應(yīng)達(dá)到定量要求。在定性測定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時(shí)應(yīng)該使用相同口徑的滴管，并保持正確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。加酶結(jié)合物和加底物的操作和要求與加標(biāo)本相同。
  (3)保溫：在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后。此時(shí)反應(yīng)的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。保溫容器最好是水浴，ELISA板底應(yīng)貼著水中，使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋。也可將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該預(yù)溫至規(guī)定的溫度，如用保溫箱保溫，空濕盒的預(yù)溫更為重要。
  (4)洗滌：洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定關(guān)著成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中投有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的，因此在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在洗滌液中加入吐溫一類物質(zhì)可提高洗滌的效果。洗滌如不徹底，特別在最后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
  ELISA板的洗滌一般采用以下方法;①吸干反應(yīng)液;②將洗滌液注滿板孔;③放置2min，略作搖動;④吸干或傾去孔內(nèi)液后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3～4次，有時(shí)甚至需洗5～6次。也可使用板式ELISA自動洗滌儀，但應(yīng)該先檢查儀器的實(shí)際使用效果。洗滌儀的每枝吸液管必須同樣貼近相應(yīng)孔的底部。以保證各孔的洗滌效果相同。
  (5)顯色和比色：在定量測定中加入底物后反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。但在定性測定中反應(yīng)一般可在室溫中進(jìn)行。如底物為OPD，應(yīng)避光放置。反應(yīng)時(shí)間也不需嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽性對照和陰性對照的呈色情況而及時(shí)加終止液。為確保各孔的反應(yīng)時(shí)間相同，加終止液的程序和速度應(yīng)與加底物液時(shí)一致。
  定性測定如陰性反應(yīng)呈色淺淡，有時(shí)可用目視判斷結(jié)果。板式ELISA一般均用酶標(biāo)測讀儀在規(guī)定的波長測讀吸光度。自動酶標(biāo)測讀儀使用前應(yīng)先測試與所用ELISA板各孔的匹配性和結(jié)果的重復(fù)性。
  比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物的孔)和空白孔(以生理鹽水或PBS代替標(biāo)本作全過程測量的孔)，以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔校零點(diǎn)，測讀標(biāo)本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔和控制品孔的吸光度。如仍以蒸餾水校零點(diǎn)，在計(jì)算時(shí)需將以上各孔的吸光度減去空白孔的吸光度。 

痰液中分泌型IgE注意事項(xiàng)

• 1.ELISA中的主要試劑成份如抗原、抗體、酶結(jié)合物、底物等，如制備不當(dāng)或保存不妥，均易變質(zhì)失活。ELISA的步驟多，操作如不合規(guī)范，難于得到準(zhǔn)確的結(jié)果。因此為保證檢測的有效性，每次試驗(yàn)必須進(jìn)行質(zhì)量控制。優(yōu)良的試劑盒中提供的陽性對照和陰性對照一般可作為試驗(yàn)的質(zhì)控品，按其說明操作，從所得的吸光度值可以判斷試驗(yàn)的有效性。以臨床檢驗(yàn)中最常用的HBsAg檢測為例，試劑盒中的陰性對照應(yīng)為HBsAg陰性的人血清，陽性對照應(yīng)標(biāo)明HBsAg含量(例如9±2ng/ml)。每批試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)作3份陰性對照和二份陽性對照。陰性對照測定所得吸光度值應(yīng)小于某一數(shù)值(例如0.100)，而陽性對照吸光度均值減去陰性對照吸光度均值應(yīng)大于某一數(shù)值(例如0.200)。這些數(shù)值為該試劑盒在規(guī)定的測定條件下，特定的實(shí)驗(yàn)值。因此如測定結(jié)果符合要求，既表明所用試劑的有效性，又表明操作的正確性，只有在這種情況下，該批試驗(yàn)方為有效。
  2.有的試劑盒中所含陽性對照和陰性對照不符合作為質(zhì)控品的要求，或?qū)嶒?yàn)室的測定條件如比色計(jì)等，與試劑盒說明中的不同，則應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況采用合適的質(zhì)控品和從實(shí)驗(yàn)得出的本實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)控值。商品的質(zhì)控血清價(jià)格昂貴。定性測定ELISA的質(zhì)控品一般可自行制備。仍以HBsAg檢測為例。陰性對照可取自用高質(zhì)量試劑檢測為HBsAg陰性的獻(xiàn)血員。陽性對照的制備可在陰性對照血清中加入適量的HBsAg陽性血清，將此混合血清與參照標(biāo)準(zhǔn)品或定量質(zhì)控品作對比測定，標(biāo)定其HBsAg含量。然后進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，得到所需濃度的HBsAg陽性血清，再加入適量抗菌防腐劑如慶大霉霉素和柳硫汞后，分裝低溫凍存。