硝基四唑氮藍(lán)試驗概述

中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗增加，代謝中所脫的氫還原氮藍(lán)四唑成為藍(lán)黑色的點狀或塊狀物，沉積于粒細(xì)胞胞質(zhì)中，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)沉積顆粒判斷陽性率。本試驗主要用于檢測中性粒細(xì)胞的胞內(nèi)殺傷功能，可以用于診斷兒童慢性肉芽腫病，以及用于鑒別細(xì)菌性和病毒性感染。 

• 檢查部位 其他
• 科室 體檢、保健科
• 相關(guān)疾病 髓過氧化物酶缺乏癥 慢性肉芽腫病 小兒慢性肉芽腫病
• 相關(guān)癥狀

硝基四唑氮藍(lán)試驗正常值

• 正常人，一般認(rèn)為10%以上者為陽性。5%-10%為NBT陰性。若NBT為陰性，則取0.5ml肝素抗凝血加10μg細(xì)菌內(nèi)毒素后按上法試之，如NBT陽性細(xì)胞>29%，表示受檢者的中性粒細(xì)胞吞噬功能正常，若仍為5%-10%，則屬功能異常。 

硝基四唑氮藍(lán)試驗臨床意義

• NBT低值見于慢性肉芽腫、先天性丙球缺乏癥、紅斑狼瘡以及使用免疫抑制劑等。此法還可用于區(qū)別細(xì)菌與病毒感染。如為病毒感染時，雖有發(fā)熱，但NBT仍正常;只有細(xì)菌、真菌感染時，NBT陽性細(xì)胞增加。NBT試驗還可用于器官移植后發(fā)熱反應(yīng)的鑒別診斷。如因細(xì)菌感染而發(fā)熱，NBT值升高;但如因體內(nèi)非特異性反應(yīng)而發(fā)熱，則NBT值保持正常。 

硝基四唑氮藍(lán)試驗檢查方法

• 取材：血液
  硝基四唑氮藍(lán)試驗的測定原理：中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗驟增、糖代謝活躍、6-磷酸葡萄糖氧化脫氫成為戊糖。所脫的氫還原淡黃色的硝基藍(lán)四氮唑（NBT）成為藍(lán)黑色的點狀或塊狀顆粒，沉積于中性粒細(xì)胞的胞漿中，其折光性很強(qiáng)，在油鏡下很易識別。
  試劑：
  （1）2.0g/L NBT生理鹽水溶液：取NBT 20mg，加于10ml生理鹽水中，置80℃水浴，攪拌溶解，先用濾紙過濾，再經(jīng)G6除菌，分裝，放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。試驗前新鮮配制NBT應(yīng)用液，取2.0g/L NBT生理鹽水溶液加等量下述緩沖液，混合后即可。
  （2）pH7.2 0.15mol/L磷酸葡萄糖生理鹽水緩沖液：0.15mol/L Na2HPO4，70ml；0.15mol/L KH2PO4，30ml；葡萄糖100mg，混合溶解，過濾，分裝，55.16kPa，高壓滅菌20min，置冰箱保存。
  操作方法：
  （1）取肝素（100u/ml）抗凝血0.1ml放入凹玻片中，加NBT應(yīng)用液0.1ml和NBT應(yīng)用液0.1ml，混勻。置濕盒中，37℃ 15min（其間振搖1次）再移室溫15min。
  （2）取1滴混合液，推成薄片，晾干。
  （3）用甲醇固定3min，吹干，加10.0g/L沙黃水溶液染色5min（也可用50.0g/L甲基綠水溶液染色15min，或用姬姆薩-瑞氏染液染色），水洗，晾干。
  （4）用顯微鏡檢查，凡中性粒細(xì)胞的胞漿內(nèi)含有斑點狀或塊狀深藍(lán)色物質(zhì)沉著的為NBT陽性細(xì)胞，細(xì)胞核有不同程度的退行性變，細(xì)胞有時腫大。共計數(shù)100～200個中性粒細(xì)胞，計其NBT陽性細(xì)胞百分率。 

硝基四唑氮藍(lán)試驗注意事項

• (1)肝素抗凝血和NBT應(yīng)用液等量混合后保溫。保溫方式很重要，水浴中會使NBT還原減少。
  (2)計數(shù)時，凡聚集成團(tuán)或破裂的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞不計在內(nèi)。經(jīng)常有成堆的血小板黏附在中性粒細(xì)胞上，注意區(qū)別。
  (3)本試驗特異性不強(qiáng)，目前主要用于慢性肉芽腫和細(xì)菌系統(tǒng)感染的篩選。