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辣根過氧化物酶—抗辣根過氧化物酶法(PAP)概述
PAP復(fù)合物的特點(diǎn)與該法試劑制備方法有關(guān)。首先用HRP去免疫動(dòng)物,使其產(chǎn)生高效價(jià)、高特異性的抗HRP抗體,然后用HRP與之結(jié)合,因是離體制備的HRP抗HRP復(fù)合物,它的形成不同于其他抗原—抗體反應(yīng)。在抗原稍過量時(shí),所有的抗HRP抗體均參與形成可溶性PAP復(fù)合物,僅殘留少許游離的HRP。而大多數(shù)抗原—抗體反應(yīng)需要抗原絕對(duì)過量才能形成可溶性復(fù)合物。PAP復(fù)合物的形狀相當(dāng)穩(wěn)定,不受抗原量的影響,無論最初加入的抗原、抗體過量與否,最終形成的PAP復(fù)合物其HRP/抗HRP之比絕大多數(shù)為3;2,應(yīng)用離心沉降、液相擴(kuò)散及電鏡觀察等方法,顯示PAP復(fù)合物呈五角環(huán)狀結(jié)構(gòu),3個(gè)角為HRP,另2個(gè)角為抗HRP抗體,分子質(zhì)量為400~430kDa,此結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定。
辣根過氧化物酶—抗辣根過氧化物酶法(PAP)正常值
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辣根過氧化物酶—抗辣根過氧化物酶法(PAP)臨床意義
高于正常值:
(1)抗體活性高 非標(biāo)記抗體酶法最大限度地保存了抗體活性,這是因?yàn)樵谒械姆磻?yīng)過程中,任何抗體均未被酶連接,避免了標(biāo)記過程中對(duì)抗體活性的損害。
(2)靈敏度高 實(shí)驗(yàn)證實(shí),一般情況下PAP法比間接酶標(biāo)法敏感20倍。這是因?yàn)樾纬蒔AP復(fù)合物時(shí),過氧化物酶(HRP)已相當(dāng)穩(wěn)定,經(jīng)洗滌不再發(fā)生丟失。
辣根過氧化物酶—抗辣根過氧化物酶法(PAP)檢查方法
1.備齊用物,標(biāo)本容器上貼好標(biāo)簽,核對(duì)無誤后向患者解釋以取得合作。露出患者手臂,選擇靜脈,于靜脈穿刺部位上方約4~6cm處扎緊止血帶,并囑患者握緊拳頭,使靜脈充盈顯露。
2.常規(guī)消毒皮膚,待干。
3.在穿刺部位下方,以左手拇指拉緊皮膚并固定靜脈,右手持注射器,針頭斜面向上與皮膚成15度~30度,在靜脈上或旁側(cè)刺入皮下,再沿靜脈走向潛行刺入靜脈,見回血后將針頭略放平,稍前行固定不動(dòng),抽血至需要量時(shí),放松止血帶,囑患者松拳,干棉簽按壓穿刺點(diǎn),迅速拔出針頭,并將患者前臂屈曲壓迫片刻。
4.卸下針頭,將血液沿管壁緩緩注入容器內(nèi),切勿將泡沫注入,以免溶血。容器內(nèi)放有玻璃珠時(shí)應(yīng)迅速搖動(dòng),以除去纖維蛋白原;如系抗凝試管,應(yīng)在雙手內(nèi)旋轉(zhuǎn)搓動(dòng),以防凝固;如系干燥試管,不應(yīng)搖動(dòng);如系液體培養(yǎng)基,應(yīng)使血液與培養(yǎng)液混勻,并在血液注入培養(yǎng)瓶前后,用火焰消毒瓶口,注意勿使瓶塞接觸血液。
5.送實(shí)驗(yàn)室檢查。
辣根過氧化物酶—抗辣根過氧化物酶法(PAP)注意事項(xiàng)
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