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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶概述

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷,也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。該酶廣泛存在于各種組織器官、體液、血細(xì)胞中,是溶酶體中的一種酸性水解酶。其測定方法有比色法和熒光光度法。 

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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶正常值

  • 1、對硝基酚比色法:血清NAG21.54±6.4U/L,尿液NAG呈正態(tài)分布,中位數(shù)為9.13U/g肌酐,第95百分位數(shù)上限為16.10U/g肌酐。
    2、熒光光度法:
    成人血清:9.94±2.O7U/L。
    成人尿液:6.39±3.19U/LCre。 

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶臨床意義

  • 血、尿NAG活性測定對反映腎實質(zhì)病變,尤其是急性損傷和活動期病變更敏感,主要用于早期腎損傷的監(jiān)測和病情觀察。
    1、腎小管疾病重金屬(汞、鉛、鎘等)及藥物性腎損傷、缺血、缺氧、失血、休克等均可引起NAG活性增加。
    2、腎病綜合征尿NAG常明顯增加,緩解期下降,復(fù)發(fā)時迅速回升,故可作為臨床觀察指征。腎小球腎炎急性期變化較大,但與腎小管損傷相比,變化幅度較小。
    3、尿路感染的定位診斷急、慢性腎盂腎炎尿NAG上升,能與單純性膀胱炎區(qū)別??捎糜谠缙谏夏蚵犯腥镜脑\斷。
    4、腎移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測腎移植排斥反應(yīng)早期NAG即可升高,比尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率更敏感。
    5、糖尿病腎痛早期診斷糖尿病腎病尿NAG升高,用于此病的早期診斷優(yōu)于尿白蛋白及β2-微球蛋白。
    結(jié)果偏高可能疾病:腎病綜合征、尿路感染。 

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶檢查方法

  • (1)對硝基酚比色法混合,在405nm波長,1cm光徑,蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度,用(AU-AC)之差查標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    (2)熒光光度法:先將血清或尿用不含牛血清白蛋白(BSA)的緩沖液作20倍稀釋,混勻,激發(fā)波長364nm,發(fā)射波長448nm,以終止液調(diào)零,6μmol/L 4-MU管調(diào)熒光強度至100后,分別測空白管及測定管的熒光強度。 

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶注意事項

  • (1)對硝基酚比色法:
    ①基質(zhì)對硝基酚應(yīng)純化,配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L濃度,用窄帶寬分光光度計掃描吸收曲線,λmax=401nm,根據(jù)IFCC標(biāo)準(zhǔn),Aλmax=0.7316~0.7388,Eλmax=18380±90(25℃)。
    ②底物溶解度小,配制時應(yīng)先用適量pH 4.6緩沖液調(diào)成糊狀,再逐漸加緩沖液至所需量。
    ③測定結(jié)果超線性范圍時,應(yīng)將標(biāo)本用生理鹽水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
    ④尿酶濃度受尿量影響較大,應(yīng)留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值計算酶排出率,即不受尿濃縮或稀釋的影響,又不需留24h尿。
    (2)熒光光度法:
    ①熒光法測NAG已有國產(chǎn)試劑盒,其敏感度高,不受尿色干擾。
    ②也可用上海第三分析儀器廠產(chǎn)930熒光光度計,激發(fā)濾光片360,發(fā)射濾光片用(400+450)復(fù)合,效果滿意。
    ③此法酶反應(yīng)液中各成分濃度為:底物1.33mmol/L,枸櫞酸20mmol/L,Na2HPO432mmol/L。
    ④配試劑所用溶劑應(yīng)用重蒸餾水,底物應(yīng)無游離4-MU,BSA中應(yīng)無該酶或用50℃加熱2h滅活。
    ⑤血清中NAG于4℃穩(wěn)定數(shù)小時至數(shù)天,-20℃可穩(wěn)定數(shù)月。尿標(biāo)本4℃穩(wěn)定1周,也可用枸櫞酸鹽抗凝血漿。
    ⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二種酶催化水解,一種是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.30),另一種是β-N-乙酰已糖苷酶(EC 3.2.1.52),只有對提純的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。如今國內(nèi)文獻(xiàn)中常稱的NAG,嚴(yán)格地說是按所用底物命名的,而不是指酶對底物的特異性。所以如今國外文獻(xiàn)常泛稱β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。 

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