尖銳濕疣 的檢查：

醋酸白試驗 循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC) 免疫球蛋白輕鏈

一、醋酸白試驗
用3-5%醋酸外涂疣體2-5分鐘，病灶部位變白稍隆起，肛門病損可能需要15分鐘。本試驗的原理是蛋白質(zhì)與酸凝固變白的結(jié)果，HPV感染細胞產(chǎn)生的角蛋白與正常的未感染上皮細胞產(chǎn)生的不同，只有前者才能被醋酸脫色。醋酸白試驗檢測HPV的敏感性很高，它比常規(guī)檢測觀察組織學(xué)變化還好。但偶爾在上皮增厚或外傷擦破病例中出現(xiàn)假陽性、假陽性變白跡象顯得界限不清和不規(guī)則。美國CDC提示，醋酸白試驗并不是特異試驗，且假陽性較常見。
二、免疫組織學(xué)檢查
常用過氧化物酶抗過氧化物酶方法（即PAP），顯示濕疣內(nèi)的病毒蛋白，以證明疣損害中有病毒抗原。HPV蛋白陽性時，尖銳濕疣的淺表上皮細胞內(nèi)可出現(xiàn)淡紅色的弱陽性反應(yīng)。
三、組織化學(xué)檢查
取少量病損組織制成涂片，用特異抗人類乳頭瘤病毒的抗體作染色。如病損中有病毒抗原，則抗原抗體結(jié)合。在過氧化物酶抗過氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成紅色。此法特異性強且較迅速，對診斷有幫助。
四、病理檢查
主要為角化不全，棘層高度肥厚，乳頭瘤樣增生，表皮突增厚，延長，其增生程度可似假性上皮瘤樣。刺細胞和基底細胞并有相當(dāng)數(shù)量的核分裂、頗似癌變。但細胞排列規(guī)則，且增生上皮和真皮之間界限清楚。其特點為粒層和刺層上部細胞有明顯的空泡形成。此種空泡細胞較正常大，胞漿著色淡、中央有大而圓，深嗜堿性的核。通常真皮水腫、毛細血管擴張以及周圍較致密的慢性炎性浸潤。Bushke-loewenstein巨大型尖銳濕疣，表皮極度向下生長，代替了其下面的組織、易與鱗狀細胞相混，故須多次活檢。若有緩慢發(fā)展之傾向， 則為一種低度惡變的過程，即所謂疣狀癌。
五、基因診斷
迄今，HPV難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學(xué)技術(shù)檢測，主要實驗診斷技術(shù)是核酸雜交。近年來發(fā)展的PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優(yōu)點，為HPV檢測開辟了新途徑。（一）標(biāo)本的采集及處理
1．標(biāo)本的采集和預(yù)處理：用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。在作細胞學(xué)檢查的同時，將標(biāo)本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS離心（3000g，10min）洗滌2次，沉積細胞重懸于1mlPBS中，取0.5ml細胞懸液抽提DNA。
2．標(biāo)本核酸的提取：按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液（10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(1:1)，氯仿/異戊醇（24:1）各抽提2次；加1/10體積3mol/L NaAc（pH 5.2）及2.5倍體積無水乙醇置-20℃ 2h或過夜沉淀DNA；加1體積乙醇洗滌1次；用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃溫育30min。
（二）PCR擴增
1． 引物設(shè)計和合成：HPV基因組可分為早期區(qū)（E）和晚期區(qū)（L），每區(qū)含一系列開放讀碼框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非編碼區(qū)及E1、E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。Manos等從HPVL1區(qū)中選擇保守序列設(shè)計合成引物MY11和MY09見表1，該引物與HPV 6、11、16、18及33型有互補序列，也可擴增其它型HPV。
Manos等設(shè)計的HPVL1通用引物
MY11：GCMCAGGGWCATAAYAATGG
MY09：CGTCCMARRGGAWACTGATC
表1
HPV型
MY11的第1個鹼基位置
MY09的第1個鹼基位置
PCR產(chǎn)物長度（bp）
6
6722
7170
448
11
6707
7155
448
16
6584
7035
451
18
6558
7012
454
33
6539
6987
448
M=A+C， R=A+G，W=A+T，Y= C+T
表2列述了Manos等設(shè)計的寡核苷酸探針。公用混合探針序列選自HPVL1區(qū)中另一保守序列，可與MY11和MY09引物產(chǎn)生的多種HPVL1 PCR擴增產(chǎn)物雜交：型特異探針只與相應(yīng)HPV型有互補序列，用于檢出的HPV分型。
表2 Manos等設(shè)計的HPVL1 PCR產(chǎn)物探針