2.病原體分離 可從血液，骨髓，腦脊液，尿液，膿液等進(jìn)行分離，牛型布魯菌初分離時(shí)不易生長(zhǎng)，需有適當(dāng)?shù)亩趸辑h(huán)境，因布魯菌生長(zhǎng)較慢，故各種培養(yǎng)需經(jīng)孵育2～4周后仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，才能判為陰性，但有人報(bào)告，如采用BACTEC9240血培養(yǎng)系統(tǒng)，則93%(90/97)可在5天內(nèi)或97.6%(41/42)可在2～6天內(nèi)檢出，最近的報(bào)告也證實(shí)了這一點(diǎn)：血培養(yǎng)均可在7天內(nèi)，骨髓培養(yǎng)均在4天內(nèi)獲得陽(yáng)性結(jié)果，一般認(rèn)為血培養(yǎng)陽(yáng)性率急性期高，慢性期低，骨髓培養(yǎng)的陽(yáng)性率較血培養(yǎng)高，必要時(shí)可將標(biāo)本接種豚鼠以分離布魯菌，有人建議，先將標(biāo)本，特別是慢性布氏菌病的血液注入雞蛋的卵黃中，37℃培養(yǎng)5天后，再將卵黃液轉(zhuǎn)種到瓊脂斜面上，37℃ 2～3天后觀察，認(rèn)為可提高陽(yáng)性率。

3.免疫學(xué)檢查

(1)血清凝集試驗(yàn)：方法很多，常用者有試管法和平板法，前者較靈敏，操作也較簡(jiǎn)單，特異性也較好，故一般實(shí)驗(yàn)室常用;后者操作更簡(jiǎn)單，靈敏性也高，但可有假陽(yáng)性，故適用于篩查，平板法也有很多種，其中以虎紅緩沖液玻片凝集試驗(yàn)(RBPT)效果最佳，凝集試驗(yàn)于病程第1周即可出現(xiàn)，第2～3周常呈強(qiáng)陽(yáng)性，試管法1∶100以上有意義，病程中效價(jià)有4倍以上升高者意義更大，但接種過(guò)霍亂菌苗，兔熱病菌苗，布魯菌菌苗或做過(guò)布魯菌素皮內(nèi)試驗(yàn)者均可使凝集效價(jià)增高，應(yīng)當(dāng)注意，另外凝集反應(yīng)可有前帶現(xiàn)象(低稀釋度時(shí)陰性，而高稀釋度時(shí)反陽(yáng)性)故稀釋度至少應(yīng)在1∶100以上，發(fā)生前帶現(xiàn)象的原因，有人認(rèn)為是由于存在IgA抗體，有人認(rèn)為與：IgA，IgG，IgM的比例有關(guān)，當(dāng)以IgA抗體為主時(shí)就可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，凝集反應(yīng)在急性期時(shí)陽(yáng)性率很高，可達(dá)80%～90%，慢性期則較低，僅30%左右。

(2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：1∶320為陽(yáng)性，靈敏性比凝集實(shí)驗(yàn)還高，特異性也很好，且可分別測(cè)定IgM，IgG，IgA抗體，其中IgM抗體出現(xiàn)較早，約于感染后1個(gè)月達(dá)高峰，然后開(kāi)始下降，IgG抗體產(chǎn)生較晚，至6個(gè)月達(dá)高峰，10個(gè)月后開(kāi)始下降，IgA抗體的消長(zhǎng)規(guī)律與IgG相似，且不易被巰基化合物破壞，分別測(cè)定不同抗體有助于復(fù)發(fā)的判斷，復(fù)發(fā)時(shí)IgG抗體重新升高，而IgM，IgA抗體常繼續(xù)下降，本法還可分別測(cè)定抗胞質(zhì)(CP)抗體及抗LSP抗體，前者特異性較好，但出現(xiàn)較晚，且早期抗菌治療可影響其出現(xiàn)，后者出現(xiàn)較早，且不受抗菌藥物的影響，但特異性稍差，故如兩者同時(shí)檢測(cè)，效果最好。

(3)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：1∶16為陽(yáng)性，急性期及慢性期的陽(yáng)性率均較高，特異性也很強(qiáng)，但陽(yáng)性出現(xiàn)時(shí)間較晚，病程第3周才開(kāi)始陽(yáng)性，且操作較為復(fù)雜，故僅用于診斷困難者，特別是慢性患者。

(4)抗入球蛋白試驗(yàn)：1∶160( )為陽(yáng)性，用于測(cè)定不完全抗體，陽(yáng)性出現(xiàn)較晚，消失也較慢，比凝集試驗(yàn)及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)更靈敏，急性期及慢性期陽(yáng)性率均較高，特異性也較強(qiáng)，但操作較復(fù)雜，故僅用于診斷困難的病例，特別是慢性患者。

(5)其他血清學(xué)試驗(yàn)：被動(dòng)血凝試驗(yàn)，瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，間接免疫熒光試驗(yàn)，免疫電泳以及斑點(diǎn)免疫法(應(yīng)用銀標(biāo)記的布菌特異性抗原)等均可應(yīng)用，有人應(yīng)用2-巰基乙醇試驗(yàn)來(lái)鑒別自然感染和菌苗免疫，但尚待研究。

(6)皮內(nèi)試驗(yàn)為遲發(fā)性超敏反應(yīng)，發(fā)病后2～3周開(kāi)始出現(xiàn)陽(yáng)性，痊愈后仍能持續(xù)數(shù)年至20年，故陽(yáng)性時(shí)不能鑒別是現(xiàn)癥患者還是既往感染，一般僅用于流行病學(xué)調(diào)查，但陰性時(shí)則不支持本病的診斷。

4.分子生物學(xué)檢查 近年來(lái)有人應(yīng)用能擴(kuò)增編碼Mr為31×103布魯菌抗原的223bp基因片段的引物進(jìn)行PCR法以診斷布病，認(rèn)為特異性與靈敏性均很好，除Ochrobactrum spp外，其他在血清學(xué)和種系發(fā)生學(xué)(phylogenesis)與布魯菌有關(guān)的其他微生物均陰性，有人對(duì)31例布氏菌病患者及45例健康人進(jìn)行此種檢測(cè)，結(jié)果特異性100%，陽(yáng)性率97%，而且發(fā)現(xiàn)血清的陽(yáng)性率高于全血，最近又有人應(yīng)用套式(nest)PCR，認(rèn)為可檢測(cè)到30個(gè)細(xì)菌，且無(wú)交叉反應(yīng)。

組織病理可在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)如淋巴結(jié)，脾，肝產(chǎn)生上皮樣細(xì)胞肉芽腫，皮損的組織學(xué)變化常無(wú)特異性，血管周圍有強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)，血管內(nèi)皮明顯增生，肉芽腫形成。