內(nèi)外結(jié)合胰島功能體外評估方法詳解

2018-11-12 來源：菲糖新動標(biāo)簽：掌上醫(yī)生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯(lián)盟美容護(hù)膚

摘要：實(shí)驗(yàn)前各組大鼠自由攝食飲水，戊巴比妥鈉(50mg／kg，ip)麻醉下取出胰臟。雙重結(jié)扎腸系膜動脈并剪斷、分離，取出十二指腸以下的全部腸管以充分暴露。

繼上個(gè)專題為大家介紹了β細(xì)胞功能的評估指標(biāo)與方法，這期專題我們主要集中在β細(xì)胞治療新技術(shù)方面。目前，在動物模型中對胰島β細(xì)胞功能的評估并不僅限于活體內(nèi)，除葡萄糖耐量試驗(yàn)等體內(nèi)評估技術(shù)外，胰島表面灌注及離體胰腺灌注技術(shù)等體外評估技術(shù)也逐步應(yīng)用，今天我們就將為大家詳細(xì)介紹胰島功能的體外評估方法。

胰腺灌流

1966年，大鼠胰腺灌流方法由Sussman等學(xué)者首次建立，并先后由Assan、Giroix等進(jìn)行了改進(jìn)和完善，此后廣泛應(yīng)用于大鼠胰島β細(xì)胞胰島素分泌動力學(xué)研究。下面是具體的操作流程：

胰腺分離:

實(shí)驗(yàn)前各組大鼠自由攝食飲水，戊巴比妥鈉(50mg／kg，ip)麻醉下取出胰臟。雙重結(jié)扎腸系膜動脈并剪斷、分離，取出十二指腸以下的全部腸管以充分暴露。需盡可能高的結(jié)扎食管，并在結(jié)扎線上端剪開；另一未打結(jié)的結(jié)扎線環(huán)繞胃環(huán)肝系膜，在腹中線端點(diǎn)上、膈肌根部小心暴露主動脈，然后系緊胃肝系膜上的結(jié)扎線，并于結(jié)扎上方剪斷系膜。在雙重鉗夾之間及下面鉗子的下方剪斷主動脈，從腹腔取出胰臟。放開對著腹中線起端主動脈切口上的夾子，露出主動脈口，插入動脈插管，在適當(dāng)?shù)奈恢迷o，使開口靠近結(jié)扎線，并靠近門脈末端。

灌流:

開始灌流，觀察液體從門靜脈口流出。1～2min后，停止灌流，進(jìn)行門靜脈插管，以備收集灌流液。隨后恢復(fù)灌流，保持灌流壓力約為100mmHg。灌流溫度為37.5℃，灌流速度1.75mL/min。分別收集每分鐘的灌流液，共收集30min，-20℃保存，待查胰島素含量.

胰島灌流

目前在國內(nèi)基礎(chǔ)研究中，針對動物模型所采用的胰島β細(xì)胞功能評估方法大多為分離胰島后，給予高糖/低糖刺激，并取其上清液測定胰島素濃度。這種方法反映了給予葡萄糖負(fù)荷后一定時(shí)間內(nèi)，分泌的胰島素總量，但不能同時(shí)反映胰島素在分泌時(shí)相和分泌數(shù)量方面的變化，且無法探究節(jié)律。而胰島灌流可以從分泌時(shí)相和分泌數(shù)量兩個(gè)方面評價(jià)胰島素分泌功能，更準(zhǔn)確的評估胰島功能。

離體胰島灌流系統(tǒng)

灌流準(zhǔn)備:

胰島分離后置于Hanks平衡液中，于二氧化碳孵箱38℃下孵育1h，并將胰島按每組50個(gè)進(jìn)行分組。將離體胰島灌流系統(tǒng)置于37℃下水浴，并將微最泵輸注系統(tǒng)與其連接。隨后將預(yù)先配置好的低糖灌流液充填至整個(gè)管道系統(tǒng)，在層析柱中加入葡聚糖凝膠，然后將每組50個(gè)胰島轉(zhuǎn)移至層析柱，再加入100ul葡聚糖凝膠。最后將整個(gè)管道系統(tǒng)全部浸入水浴。

灌流:

開始時(shí)用低糖灌流液以0.5ml／h的速度灌流1h，隨后換為高糖灌流液以1ml／h的速度灌流，并以開始高糖灌流時(shí)為0時(shí)間點(diǎn)，分別于灌流前30、20、10min、灌流后0、20、40、60、80、100s和2、3、4、5、7、8、9、10、15、20、25、30min收集灌流出的液體，-80℃下保存，隨后測定胰島素含量，并根據(jù)胰島素濃度繪制胰島素第一時(shí)相分泌曲線。

這些體外評估方法由于排除了體內(nèi)多種因素的干擾，能夠較準(zhǔn)確地評估胰島β細(xì)胞功能，是研究動物模型不同病理生理狀態(tài)下胰島β細(xì)胞胰島素分泌能力變化及機(jī)制、以及各種營養(yǎng)物質(zhì)和藥物對胰島β細(xì)胞功能影響及其作用機(jī)制的重要手段。

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本品不能代替藥物

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