細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法概述

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素是否符合規(guī)定。 內(nèi)毒素(Endotoxin)即革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，其毒性成分為類脂A。菌體死亡崩解后釋放出來(lái)。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測(cè)定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測(cè)時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。 

• 檢查部位 其他
• 科室 檢驗(yàn)科
• 相關(guān)疾病 嬰兒肉毒中毒綜合征 難辨芽胞桿菌腸炎 厭氧菌感染
• 相關(guān)癥狀 口角生瘡

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法正常值

• 體內(nèi)菌群的種類和比例正常，人體處于動(dòng)態(tài)平衡。 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法臨床意義

• 熱原主要是細(xì)菌釋放的一種內(nèi)毒素，熱原進(jìn)入機(jī)體血液循環(huán)系統(tǒng)會(huì)引起發(fā)熱等一系列不良反應(yīng)，因此，注射劑熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是保證注射劑安全性的重要質(zhì)量指標(biāo)。
  異常結(jié)果
  臨床上在進(jìn)行靜脈滴注大量輸液時(shí)，由于藥液中含有熱原，病人在0.5～1h內(nèi)出現(xiàn)冷顫、高熱、出汗、昏暈、嘔吐等癥狀，高熱時(shí)體溫可達(dá)40℃，嚴(yán)重者甚至可休克。 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查方法

• 一、效價(jià)測(cè)定
  細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物進(jìn)行標(biāo)定，確定基重量的相當(dāng)效價(jià)。每1mg工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。效價(jià)測(cè)定方法如下：每批工作標(biāo)準(zhǔn)品至少取4支樣品，使用同一批號(hào)鱟試劑、同1支標(biāo)準(zhǔn)品。每支工作標(biāo)準(zhǔn)品按重量、標(biāo)準(zhǔn)品按單位，分別用內(nèi)毒素檢查用水*稀釋制備一系列2倍稀釋度的內(nèi)毒素溶液，與鱟試劑反應(yīng)，當(dāng)4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的對(duì)數(shù)均值的標(biāo)準(zhǔn)差(S)小于0.365時(shí)，計(jì)算4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的幾何平均值(以ng/mg表示)及標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)值(以EU/mg表示)。
  二、試驗(yàn)準(zhǔn)備
  1、本法所用的器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素常用250℃干烤30分鐘或180℃干烤2小時(shí)，也可用其他適宜方法。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。
  2、試驗(yàn)前需核對(duì)使用批號(hào)鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值，應(yīng)符合規(guī)定。裝量加入配帶的鱟試劑溶劑。溶解后，為鱟試劑溶液，備用。
  3、供試品的稀釋：使用批號(hào)鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值小于供試品的內(nèi)毒限量時(shí)，按下式計(jì)算，用內(nèi)毒素檢查用水*將供試劑品稀釋后進(jìn)行檢查。
  供試品的稀釋倍數(shù)=X/λ
  X：供試品的內(nèi)毒素限量?jī)?nèi)毒素限量(EU/ml)
  λ：供試品鱟度劑靈敏度標(biāo)示值(EU/ml)
  三、檢查
  裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管(或0.1ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓿)4支，其中2支加入0.1ml供試品作為試品管，1支加入2λ內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品0.1ml作為陽(yáng)性對(duì)照管，1支加入配帶的鱟試劑溶液0.1ml作為陰性對(duì)照管。將試管輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中，保溫60±2分鐘。保溫過程和拿取試管要小心，避免因受到振動(dòng)造成陰性結(jié)果。
  (四)結(jié)果判斷
  將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)1800時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性記錄為(+)凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為(一)。供試品2管如為(一)，應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定，不再進(jìn)行熱原檢查法(家兔法)試驗(yàn)。如2管均為(+)，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定。如2管中1管為(+)，1管為(一)，按述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中有1管為(+)即認(rèn)為不符合規(guī)定。除正文另有規(guī)定外，有符合規(guī)定的供試品應(yīng)再以熱原檢查法(家兔法)試驗(yàn)，并根據(jù)的結(jié)果判定。
  供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限量應(yīng)符合各品種正文下的規(guī)定。
  陽(yáng)性對(duì)照為(一)或陰性對(duì)照為(+)，試驗(yàn)無(wú)效。
  附： 滅菌注射用水、注射用水、氯化鈉注射液、5%和10%葡萄糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法注意事項(xiàng)

• 在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的建立中，計(jì)算內(nèi)毒素限值L、MVD和MVC時(shí)，需要注意最大人用劑量、產(chǎn)品規(guī)格、鱟試劑的靈敏度等重要的參數(shù)，因?yàn)橛?jì)算錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致后續(xù)的所有努力均告失敗。
  常見的問題有：
  1、臨床用藥劑量確定不正確，僅用常規(guī)用藥劑量，未考慮臨床可能的人體最大用藥劑量和給藥途徑，在限值計(jì)算公式L=K/M中，由于對(duì)K值及M值的定義模糊，使K值及M值賦值不準(zhǔn)確，最終導(dǎo)致限值計(jì)算錯(cuò)誤。例如，某注射劑臨床成人每次靜脈滴注給藥40～80mg，嬰兒(三個(gè)月以上)靜脈滴注給藥每次10～20mg。按成人(體重60kg)劑量計(jì)算限值為3.75EU/mg，而嬰兒體重僅為5kg左右，計(jì)算限值約為1.25EU/mg，如果不考慮臨床每公斤體重最大用藥劑量，細(xì)菌內(nèi)毒素限值就會(huì)出現(xiàn)較大的差別。
  2、有的申報(bào)品種細(xì)菌內(nèi)毒素限值不是根據(jù)臨床用量計(jì)算出來(lái)，而是根據(jù)同品種熱原檢查的劑量推算出來(lái)的，造成限值錯(cuò)誤。
  3、有的品種細(xì)菌內(nèi)毒素限值從國(guó)外藥典抄來(lái)，沒有考慮該品種國(guó)內(nèi)上市的臨床使用劑量及中國(guó)人與國(guó)外人均體重等的差異，也造成限值確定不正確。
  4、錯(cuò)誤的計(jì)算日給藥劑量(一日內(nèi)多次給藥)。
  5、在品種規(guī)格(濃度)發(fā)生變化時(shí)，計(jì)算MVD沒有進(jìn)行調(diào)整。
  6、建立方法時(shí)所用的最大給藥劑量已經(jīng)超出了臨床所用劑量等。