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細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段概述
細(xì)胞角蛋白是細(xì)胞體的中間絲,是細(xì)胞結(jié)構(gòu)的主要成分,根據(jù)其分子量和雙向二維電泳中等電點(diǎn)的不同可以分為20種不同類型,它能在正常上皮、腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)中分化不同的上皮細(xì)胞表達(dá)。CYFRA21-1由細(xì)胞角蛋白19片段的兩個(gè)單克隆抗體組成,即單抗BMl9-21和KSl9.1,是一個(gè)分子量為4kD的酸性細(xì)胞蛋白。它主要分布于單層和復(fù)層上皮腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi),當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí),它以溶解片段的形式釋放入血清中。
細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段正常值
≤3.3μg/L。
細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段臨床意義
(1)肺癌患者,尤其是NSCLC患者的血清及胸水中 CYFRA21-1濃度升高,其敏感性隨病情進(jìn)展而增高,與肺癌的分期呈正相關(guān)。從組織學(xué)的角度來看,它對鱗癌的敏感性高于腺癌及SCLC。同時(shí),CYFRA21-1也是肺鱗癌生存及復(fù)發(fā)的一種獨(dú)立預(yù)后因素。因此,CYFRA21-1檢測對非小細(xì)胞肺癌患者的診斷、病情監(jiān)視和療效判斷有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。
(2)血清CYFlRA21-1增高還可見于乳腺癌、膀胱癌、膽道癌、胰腺癌等腫瘤性疾病,亦可見于少數(shù)肺氣腫、支氣管炎、消化性潰瘍、肝良性疾病等。
細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段檢查方法
本法分三個(gè)步驟,即抗原與抗體反應(yīng)、B和F分離和放射性測定。
(1)抗原與抗體反應(yīng):將標(biāo)本(非標(biāo)記抗原)、標(biāo)記抗原和抗血清順序定量加入小試管內(nèi),置室溫(15~30℃)作用24h,使其充分競爭結(jié)合。
(2)B、F分離:分離技術(shù)多種多樣,常用沉淀法。
①第二抗體沉淀法:又稱雙抗體法,在受檢抗原與第一抗體特異性反應(yīng)后加入相應(yīng)的第二抗體,使形成的抗原-第一抗體-第二抗體的復(fù)合物共沉,一經(jīng)離心即可使結(jié)合標(biāo)記抗原B與游離抗原F分離。本法是特異性沉淀,分離完全,非特異性結(jié)合力低。但第二抗體用量較大,成本較高。此外血清濃度、抗凝劑的有無因素可在一定程度上影響結(jié)果。
②聚乙二醇(PEG)沉淀法:使蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)狀態(tài),水化層破壞而導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。本法優(yōu)點(diǎn)是PEG制備方便、價(jià)廉、分離快速,缺點(diǎn)是非特異沉淀物較多,分離不完全。
③第二抗體-聚乙二醇沉淀法:本法既有PEG法的快速沉淀優(yōu)點(diǎn),且保持第二抗體特異性沉淀的作用,又減少第二抗體用量,并降低PEG濃度,使非特異沉淀物減少。
④活性炭吸附法:利用活性炭表面活性將小分子的游離部分吸附。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖,使它表面具有一定孔徑的網(wǎng)眼,從而允許小分子游離抗原或半抗原逸入而被吸附,而大分子復(fù)合物則被排斥在外。在抗原與抗體反應(yīng)后,加入葡聚糖-活性炭,放置5~10min,使游離抗原吸附在活性炭顆粒上,離心使顆粒沉淀,上清液中含有結(jié)合的標(biāo)記抗原。
(3)放射性強(qiáng)度測定:B和F分離后,即可測定其放射性強(qiáng)度。測量儀器有兩類:液體閃爍計(jì)數(shù)儀(測β射線)和晶體閃爍計(jì)數(shù)儀(測γ射線)。計(jì)數(shù)單位是探測器輸出的電脈沖數(shù),單位為cpm(脈沖數(shù)/min)。每次測定均需作一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,以標(biāo)準(zhǔn)抗原的不同濃度為橫坐標(biāo),以測到的相應(yīng)放射性強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖。放射性強(qiáng)度可任選B或F,亦可采用計(jì)算值B/B+F、B/F或B/B0。標(biāo)本應(yīng)作雙份測定,取其平均值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的受檢抗原濃度。
細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段注意事項(xiàng)
觀察臨床肺癌手術(shù)及放、化療前后療效的動(dòng)態(tài)監(jiān)測,是一項(xiàng)重要的輔助指標(biāo)。